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                分子間相互作用

                蛋白間相互作用是生命現象發生的基礎,研究其相互作用可以闡明生物反應的機理,揭示生命現象的本質。雖然有一些蛋白可以以單體的形式發揮作用,但是大部分的蛋白都是通過蛋白間相互作用或形成蛋白復合物來發揮作用的。近年來,研究分子相互作用的技術不斷出現。德泰生物提供蛋白相互作用檢測服務,包括Fortebio octet生物膜層光學干涉技術(BLI)、免疫共沉淀(CO-IP, Co-Immunoprecipitation)、GST pull-down等,能夠實現對蛋白,小分子,抗體及Fab片段等相互作用的定性定量分析。

                蛋白相互作用檢測服務

                • 生物膜層光學干涉(BLI)
                • 蛋白互作定性/定量分析
                • 瞬時/穩定蛋白相互作用

                • 抗原抗體反應特異性
                • 蛋白互作定性分析
                • 體內相互作用檢測

                • GST-GSH偶聯球珠特異性
                • 蛋白互作定性分析
                • 體外相互作用檢測

                服務優勢:

                德泰專注蛋白表達,可根據您的檢測要求,定制蛋白
                德泰專注蛋白表達,可根據您的檢測要求,定制蛋白
                豐富的小分子數據庫資源,查找/篩選相互作用小分子
                豐富的小分子數據庫資源,查找/篩選相互作用小分子
                可以檢測體外/體內,弱/強,瞬時/穩定蛋白相互作用
                可以檢測體外/體內,弱/強,瞬時/穩定蛋白相互作用

                蛋白相互作用

                以下主要介紹了德泰蛋白相互作用檢測的三種方法:Fortebio Octet ,免疫共沉淀CO-IP,GST pull-down。每種方法有其適用性,可根據實驗要求選擇。

                Fortebio octet

                Octet? RED96系統是由ForteBio公司生產的全自動測試平臺,該系統利用生物膜層光學干涉技術,只需微量樣品,無需純化,即可對分子間相互作用進行定性和定量的分析。包括對多個已知或未知蛋白的相互作用力進行排序,鑒定其是否存在蛋白互作等。Fortebio octet檢測靈敏度較高并能夠測得實時的分析結果,因此可以檢測弱親和力的相互作用和瞬時相互作用。

                Fortebio相關論文

                免疫共沉淀 CO-IP

                免疫共沉淀是檢測蛋白相互作用的常用方法。以抗原抗體間的特異性為基礎,特異性抗體從細胞抽提物中分離目的蛋白和相互作用蛋白的復合物,免疫共沉淀之后通過Western blot及質譜法確定相互作用蛋白。CO-IP既可以鑒定已知兩個蛋白在體內的相互作用,也可以篩選未知的相互作用蛋白,但都無法進行相互作用的定量分析,同時CO-IP的靈敏度較低,檢測不到蛋白間的弱相互作用和瞬時相互作用,且實驗的假陽性率較高,設置正確的對照十分重要。

                CO-IP相關論文

                GST pull-down

                GST融合蛋白沉降技術(GST pull down)利用了GST對谷胱甘肽偶聯球珠的親和性,從非相互作用蛋白的溶液中純化相互作用蛋白。該法可以鑒定與已知蛋白相互作用的未知蛋白,也可鑒定兩個已知蛋白間是否存在相互作用。GST pull down的成功應用取決于是否有足夠多并保持可溶性的GST重組融合蛋白,德泰生物提供可溶性蛋白表達服務,并承諾不成功零收費。

                pull down相關論文

                蛋白相互作用FAQ

                1.如何選擇分子間相互作用檢測方法?

                技術 Fortebio octet CO-IP GST pull-down
                原理 生物膜層光學干涉技術 (BLI) 抗原抗體反應的特異性 GST對谷胱甘肽偶聯球珠的特異性
                篩選互作蛋白 X
                驗證互作蛋白
                瞬時相互作用 X X X
                弱親和力檢測 X X
                定量分析 X X
                定性分析

                2.德泰的分子間相互作用檢測服務優勢?

                • 德泰可以提供樣品制備到蛋白互作檢測一站式服務,包括蛋白,抗原抗體等。我們可以提供原核表達或哺乳動物系統制備重組蛋白,可以根據您的檢測要求加上特定的標簽。您可以選擇德泰的原核可溶性保證服務制備蛋白,我們承諾不成功,零收費;
                • Fortebio octet,靈敏度高,測得弱親和力相互作用;實時監控,測得瞬時相互作用;實驗可獲得詳細數據,可對蛋白相互作用進行定量分析,和不同蛋白間的相互作用力進行排序;
                • CO-IP,GST pull down用于對分子間相互作用定性分析,包括鑒定已知兩個蛋白是否存在相互作用,篩選與已知蛋白互作的未知蛋白;
                • 小分子庫資源:專業技術人員查找資源,在您不確定相互作用小分子的情況下,我們可以在數據庫中進行查找篩選;

                3.什么是Fortebio octet生物膜干涉技術?

                  Octet? RED96系統是由ForteBio公司生產的全自動測試平臺,可用于測量蛋白與分子間的相互作用。該系統基于光纖生物傳感器的生物膜層光學干涉技術,可測定生物分子間相互作用的實時分析結果。

                Fortebio octet案例介紹
                分子間相互作用

                蛋白相互作用檢測方法綜述

                隨著生命科學研究的不斷發展,人們逐漸意識到基因組信息已經不能完全解釋和預測各種生命過程及現象,而蛋白質作為細胞活性和功能的執行者,越來越受到人們的關注。然而,蛋白質功能的發揮不是憑借單個蛋白質獨立執行,而是依靠蛋白質與蛋白質相互作用(protein-protein interaction, PPI)執行其功能。因此,蛋白質相互作用出現異常將會影響細胞活性和功能的發揮,從而引發許多疾病,如神經退行性疾病、癌癥等。抑制這些異常的蛋白質相互作用對臨床治療具有重要意義。

                檢測范圍 檢測方法
                In vivo體內 免疫共沉淀(Co-IP)
                熒光共振能量轉移(FRET)
                鄰近蛋白標記BioID
                酵母雙雜交(Yeast Two-hybrid)
                In vitro體外 融合蛋白沉降技術(GSTPull down)
                Far-Western
                表面等離子共振(SPR)
                TAP串聯親和純化技術
                蛋白質芯片技術(Protein microarrays)

                免疫共沉淀

                該技術是研究蛋白相互作用的經典技術,應用廣泛且可信度較高。它利用特異性抗體從細胞抽提物中分離目的蛋白和相互作用蛋白的復合物,之后通過Western blot及質譜法確定相互作用蛋白。如果在非變性的條件下裂解細胞,蛋白間相互作用可以保持,所以就可利用免疫共沉淀方法找出相互作用的蛋白質。免疫共沉淀既可以用于檢驗已知的兩個蛋白質在體內的相互作用,也可以找出未知的蛋白相互作用。

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