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                重組蛋白表達純化

                德泰生物致力于為客戶提供高純度、低成本的活性重組蛋白,包括各類受體、細胞因子、生長因子、轉錄因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等,滿足客戶下游科研實驗研究的需求。德泰擁有先進的蛋白表達技術及豐富的蛋白表達經驗,完成了多種正常條件下不表達、難表達、表達量低的蛋白的制備。

                迄今為止,德泰共交付3000+組重組蛋白(各類野生型蛋白及突變型蛋白)。交付的蛋白被用于抗體制備、ELISA、IHC、藥物研究、動物實驗、晶體結構分析、體外酶活測定、細胞實驗等下游實驗。

                為什么選擇我們?

                • 高成功率:自建實驗室,自主研發多項實驗技術,實驗成功率大于98%,交付的近千組蛋白已成功應用于抗原生產,抗體藥研發,診斷試劑,疫苗研究等領域
                • 不成功不收費:可溶性原核表達,蛋白表達不成功不收費;哺乳動物細胞表達,活性更高,幾十種細胞轉染經驗,重組抗體表達,不成功不收費
                • 高純度蛋白:四大蛋白純化方法,結合AKTA蛋白純化系統,可定制高純度蛋白(>95%),應用于酶制劑,晶體結構分析,生物活性實驗等
                • 一站式服務:只需提供基因序列,德泰完成載體構建,蛋白表達,蛋白純化(內毒素去除/RNA酶去除),抗體制備,相互作用分析等一站式服務。德泰蛋白表達技術平臺 ?

                  蛋白表達技術平臺設施

                重組蛋白表達系統

                重組蛋白有很多的應用,包括抗原制備,蛋白相互作用,酶學分析,及藥物靶點研究。選擇合適的蛋白表達系統,對下游蛋白的應用有重要影響。蛋白功能,產率,成本是優先考慮的幾個因素。德泰為您提供多個重組蛋白表達系統,滿足您的不同需求。


                提供多種重組質粒和轉化宿主菌株,優化溫度、IPTG濃度、培養時間等表達條件,根據最高產量參數組合進行放大。

                適用于表達原核蛋白,簡單的真核蛋白以及同位素標記蛋白等。

                自建細胞房,自主研發高表達載體,十幾年細胞培養,幾十種細胞轉染經驗,快速交付毫克或工業級蛋白,不成功不收費。

                適用表達分泌蛋白,跨膜蛋白,酶類,離子通道等,蛋白結構接近天然狀態,活性更高。

                制定靈活的表達載體構建方案,優化篩選分泌型表達載體(pPIC9、pHIL-S1、pPICZa)與宿主菌株,包括Mut+、Muts。

                適用于表達真核蛋白、分泌蛋白、某些胞質定位且無糖基化修飾蛋白等。
                昆蟲表達系統

                昆蟲表達系統
                (Insect)


                根據蛋白性質選擇胞內表達或分泌表達,篩選高效融合載體與表達細胞,確定最優表達量的最佳表達條件。

                適用于表達高等真核生物蛋白、分泌蛋白、多元蛋白復合物等。

                重組表達案例

                案例一

                案例概況:表達的目的蛋白分子量在10kD左右,利用大腸桿菌表達系統進行表達。實驗的難點為蛋白需要無標簽表達純化,純化難度較大;同時由于下游應用的特殊性,需要去除蛋白質中的DNA。

                目的蛋白純化圖
                DNA檢測結果

                Fig1 :目的蛋白純化圖
                Fig2:DNA檢測結果

                德泰通過查閱大量文獻及多次純化條件摸索,最終成功純化得到目的蛋白,純度>90%。經瓊脂糖凝膠電泳檢測,無DNA殘留。

                案例二

                案例概況:該案例中目的蛋白為聚體蛋白(蛋白的活性結構以四聚體形式存在),客戶采用哺乳動物瞬轉的方法表達該蛋白,在表達時遇到了轉染效率低、蛋白表達水平低,細胞培養上清中無法檢測到四聚體等問題。在實驗失敗后,客戶找到德泰生物。
                公司接手該項目之后,對基因序列、表達載體與宿主細胞進行優化,提高蛋白表達水平。同時對轉染方法進行優化,優化后轉染效率明顯提高。

                轉染方法優化前與優化后轉染效率對比

                Fig3:轉染方法優化前(左)與優化后(右)轉染效率對比

                采用親和純化的方法進行目的蛋白的純化,層析過柱之后,在還原和非還原狀態下分別對上清洗脫組分進行電泳,證實細胞培養上清中確實存在該聚體蛋白。最終通過親和純化,成功純化得到該聚體蛋白。

                還原狀態與非還原狀態上清洗脫組分電泳圖

                Fig4:還原狀態(lane 3)與非還原狀態(lane 4)上清洗脫組分電泳圖

                附錄:重組蛋白表達系統對比表

                特點 大腸桿菌 酵母 昆蟲細胞 哺乳動物細胞
                生產周期 4~6周 ~9周 ~9周 7~9周
                價格 + ++ +++ +++
                表達水平 高(>50%) 低-高(>10%) 低-高(>20%) 低-高(>30%)
                蛋白質折疊 部分折疊 不完全正確折疊 正確折疊 正確折疊
                規?;a +++ ++ ++ ++
                翻譯后修飾 磷酸化
                乙?;?/td>
                酰胺化
                γ-羧基
                糖基化

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